Меню

Пцр вирус гепатита с не обнаружен

Оглавление:

Исследования на вирус гепатита В (ИФА и ПЦР)

Антиген «s» вируса гепатита В (HBsAg)

Поверхностный антиген гепатита В в сыворотке крови в норме отсутствует.
Обнаружение поверхностного антигена (HBsAg) гепатита В в сыворотке подтверждает острое или хроническое инфицирование вирусом гепатита В.

При остром заболевании HBsAg выявляется в сыворотке крови в последние 1-2 недели инкубационного периода и первые 2-3 недели клинического периода. Циркуляция HBsAg в крови может ограничиваться несколькими днями, поэтому следует стремиться к раннему первичному обследованию больных. Метод ИФА позволяет выявить HBsAg более чем у 90% больных. Почти у 5% больных самые чувствительные методы исследования не обнаруживают HBsAg, в таких случаях этиология вирусного гепатита В подтверждается наличием анти-HBсAg JgM или ПЦР.

Концентрация HBsAg в сыворотке крови при всех формах тяжести гепатита В в разгар заболевания имеет значительный диапазон колебаний, вместе с тем имеется определенная закономерность: в остром периоде существует обратная связь между концентрацией HBsAg в сыворотке и тяжестью болезни.

Высокая концентрация HBsAg чаще наблюдается при легких и среднетяжелых формах болезни. При тяжелых и злокачественных формах концентрация HBsAg в крови чаще низкая, причем у 20% больных с тяжелой формой и у 30% со злокачественной антиген в крови может вообще не обнаруживаться. Появление на этом фоне у больных антител к HBsAg расценивается как неблагоприятный диагностический признак; он определяется при злокачественных формах гепатита В.

При остром течении гепатита В концентрация HBsAg в крови постепенно снижается вплоть до полного исчезновения этого антигена. HBsAg исчезает у большинства больных в течение 3 месяцев от начала острой инфекции.

Снижение концентрации HBsAg более чем на 50% к концу 3-й недели острого периода, как правило, свидетельствует о близком завершении инфекционного процесса. Обычно у больных с высокой концентрацией HBsAg в разгар болезни он обнаруживается в крови в течение нескольких месяцев.
У больных с низкой концентрацией HBsAg исчезает значительно раньше (иногда через несколько дней после начала заболевания). В целом срок обнаружения HBsAg колеблется от нескольких дней до 4-5 мес. Максимальный срок обнаружения HBsAg при гладком течении острого гепатита В не превышает 6 месяцев от начала заболевания.

HBsAg может быть обнаружен у практически здоровых людей, как правило, при профилактических или случайных исследованиях. В таких случаях исследуют другие маркеры вирусного гепатита В – анти HBсAg JgM, анти- HBсAg JgG, анти HBеAg и изучают функцию печени.

При отрицательных результатах необходимы повторные исследования на HBsAg.
Если повторные исследования крови в течение более 3 месяцев выявляют HBsAg, такого пациента относят к хроническим больным вирусным гепатитом В.
Наличие HBsAg – довольно распространенное явление. В мире насчитывается более 300 млн. носителей, а у нас в стране – около 10 млн. носителей.
Прекращение циркуляции HBsAg с последующей сероконверсией (образование анти-HBs) всегда свидетельствует о выздоровлении — санации организма.

Исследование крови на наличие HBsAg применяется в следующих целях:

  • для диагностики острого гепатита В:
    • инкубационный период;
    • острый период заболевания;
    • ранняя стадия реконвалесценции;
  • для диагностики хронического вирусного гепатита В;
  • при заболеваниях:
    • персистирующем хроническом гепатите;
    • циррозе печени;
  • для скрининга и выявления больных в группах риска:

  • больные с частыми гемотрансфузиями;
  • больные с хронической почечной недостаточностью;
  • больные с множественным гемодиализом;
  • больные с иммунодефицитными состояниями, в том числе СПИДом.
  • Оценка результатов исследования

    Результаты исследования выражаются качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие HBsAg в сыворотке крови. Положительный результат – выявление HBsAg свидетельствует об инкубационном или остром периоде острого вирусного гепатита В, а также при хроническом вирусном гепатите В.

    Антитела к ядерному антигену вируса гепатита В JgG (анти- HBcAg JgG )

    В норме анти-HBcAg JgG в сыворотке отсутствует.
    У больных анти-HBcAg JgG появляются в острый период вирусного гепатита В и сохраняются на протяжении всей жизни. Анти-HBcAg JgG – ведущий маркер перенесенного ВГВ.

    Исследование крови на наличие анти-HBcAg JgG применяются для диагностики:

  • хронического вирусного гепатита В при наличии HBs антигена в сыворотке крови;
  • перенесенного вирусного гепатита В.
  • Оценка результатов исследования

    Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие анти-HBcAg JgG в сыворотке крови. Положительный результат – выявление анти-HBcAg JgG свидетельствует об острой инфекции, реконвалесценции или ранее перенесенном вирусном гепатите В.

    Антиген «е» вируса гепатита В (HBeAg)

    В норме HBeAg в сыворотке крови отсутствует.
    HBeAg можно обнаружить в сыворотке крови большинства больных острым вирусным гепатитом В. Он обычно исчезает в крови раньше HBs-антигена. Высокий уровень HBeAg в первые недели заболевания или обнаружение его на протяжении более 8 недель дает основание заподозрить хроническую инфекцию.

    Этот антиген часто обнаруживается при хроническом активном гепатите вирусной этиологии. Особый интерес к определению HBeAg связан с тем, что его обнаружение характеризует активную репликативную фазу инфекционного процесса . Установлено, что высокие концентрации HBeAg соответствуют высокой ДНК-полимеразной активности и характеризуют активную репликацию вируса.

    Наличие HBeAg в крови свидетельствует о высокой ее инфекциозности, т.е. присутствии в организме обследуемого активной инфекции гепатита В, и обнаруживается только в случае присутствия в крови HBs-антигена. У больных хроническим активным гепатитом противовирусные препараты применяются только при обнаружении в крови HBeAg. HBeAg – антиген – маркер острой фазы и репликации вируса гепатита В.

    Исследование крови на наличие HBe-антигена применяется для диагностики:

  • инкубационного периода вирусного гепатита В;
  • продромального периода вирусного гепатита В;
  • острого периода вирусного гепатита В;
  • хронического персистирующего вирусного гепатита В.
  • Оценка результатов исследования

    Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие HBeAg в сыворотке крови. Положительный результат – выявление HBeAg свидетельствует об инкубационном или остром периоде острого вирусного гепатита В или продолжающейся репликации вируса и инфекциозности больного.

    Антитела к антигену «е» вируса гепатита В (anti-HBeAg)

    Анти-HBeAg в сыворотке в норме отсутствует. Появление анти-НВeAg антител указывает обычно на интенсивное выведение из организма вируса гепатита В и незначительное инфицирование больного.

    Эти антитела появляются в острый период и сохраняются до 5 лет после перенесенной инфекции. При хроническом персистирующем гепатите анти-НВeAg обнаруживаются в крови больного вместе с НВsAg. Сероконверсия, т.е. переход HBeAg в анти-НВeAg, при хроническом активном гепатите, чаще прогностически благоприятна, но такая же сероконверсия при выраженной цирротической трансформации печени прогноза не улучшает.

    Исследование крови на наличие анти-НВeAg применяются в следующих случаях при диагностике вирусного гепатита В:

  • установление начальной стадии заболевания;
  • острый период инфекции;
  • ранняя стадия реконвалесценции;
  • реконвалесценция;
  • поздняя стадия реконвалесценции.
  • диагностика недавно перенесенного вирусного гепатита В;
  • диагностика хронического персистирующего вирусного гепатита В.
  • Оценка результатов исследования

    Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие антител к HBeAg в сыворотке крови. Положительный результат – выявление антител к HBeAg, которые могут свидетельствовать о начальной стадии острого вирусного гепатита В, остром периоде инфекции, ранней стадии реконвалесценции, реконвалесценции, перенесенном недавно вирусном гепатите В или персистирующем вирусном гепатите В.

    Критериями наличия хронического гепатита В являются:

  • бнаружение или периодическое выявления ДНК ВГВ в крови;
  • постоянное или периодическое повышение активности АЛТ/АСТ в крови;\
  • морфологические признаки хронического гепатита при гистологическом исследовании биоптата печени.
  • Обнаружение вируса гепатита В методом ПЦР (качественно)

    Вирус гепатита В в крови в норме отсутствует.
    Качественное определение вируса гепатита В методом ПЦР в крови позволяет подтвердить наличие вируса в организме больного и тем самым устанавливает этиологию заболевания.

    Данное исследование дает полезную информацию для диагностики острого вирусного гепатита В в инкубационном и раннем периоде развития заболевания, когда основные серологические маркеры в крови у пациента могут отсутствовать. Вирусную ДНК в сыворотке крови обнаруживают у 50% больных при отсутствии HBeAg. Аналитическая чувствительность метода ПЦР составляет не менее 80 вирусных частиц в 5 мкл, прошедшей выявление ДНК пробы, специфичность – 98%.

    Этот метод имеет важное значение для диагностики и мониторинга течения хронического ВГВ. Примерно 5-10% случаев цирроза и других хронических заболеваний печени обусловлены хроническим носительством вируса гепатита В. Маркерами активности таких заболеваний является наличие HBeAg и ДНК вируса гепатита В в крови.

    Метод ПЦР позволяет определять в крови ДНК вируса гепатита В как качественно, так и количественно. Определяемым фрагментом в обоих случаях служит уникальная последовательность ДНК гена структурного белка вируса гепатита В.

    Читайте так же:  Как понять острый или хронический гепатит в

    Обнаружение ДНК вируса гепатита В в биоматериале с помощью ПЦР необходимо для:

  • разрешения сомнительных результатов серологических исследований;
  • выявление острой стадии заболевания по сравнению с перенесенной инфекцией или контактом;
  • контроля эффективности противовирусного лечения.
  • Исчезновение ДНК вируса гепатита В из крови – признак эффективности терапии

    Обнаружение вируса гепатита В методом ПЦР (количественно)

    Этот метод дает важную информацию об интенсивности развития заболевания, об эффективности лечения и о развитии резистентности к активным препаратам.
    Для диагностики вирусного гепатита методом ПЦР в сыворотке крови применяются тест-системы, чувствительность которых составляет 50-100 копий в пробе, что позволяет детектировать вирус при его концентрации 5 Х 10^3 -10^4 копий/мл. ПЦР при вирусном гепатите В безусловно необходима для суждения о вирусной репликации.

    Вирусную ДНК в сыворотке крови обнаруживают у 50% больных при отсутствии HBeAg. Материалом для выявления ДНК вируса гепатита В могут служить сыворотка крови, лимфоциты, гепатобиоптаты.

    • Оценку уровня виремии осуществляют следующим образом:
    • менее 2.10^5 копий/мл (менее 2.10^5 МЕ/мл) – низкая виремия ;
    • от 2.10^5 копий/мл (2.10^5 МЕ/мл) до 2.10^6 копий/мл (8.10^5 МЕ/мл) – средняя виремия;
    • более 2.10^6 копий/мл – высокая виремия.

    Существует зависимость между исходом острого вирусного гепатита В и концентрацией ДНК ВГВ в крови больного. При низком уровне виремии процесс хронизации инфекции близок к нулю, при средней – хронизация процесса наблюдается у 25-30% больных, а при высоком уровне виремии острый вирусный гепатит В чаще всего переходит в хронический.

    Показаниями для лечения хронического ВГВ интерфероном-альфа следует считать наличие маркеров активной репликации вируса (выявление HBsAg, HBeAg и ДНК ВГВ в сыворотке крови в течение предшествующих 6 месяцев.).

    Критериями оценки эффективности лечения служат исчезновение HBeAg и ДНК ВГВ в крови, что обычно сопровождается нормализацией уровня трансаминаз и долговременной ремиссией заболевания, ДНК ВГВ исчезает из крови к 5-му месяцу лечения у 60%, к 9-му месяцу – у 80% больных. Снижение уровня виремии на 85% и более к третьему дню от начала лечения по сравнению с исходным служит быстрым и достаточно точным критерием для прогнозирования эффективности терапии.

    ПЦР — диагностика вируса гепатита С (количественно)

    Исследование для выявления возбудителя гепатита C (HCV), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени определяется наличие генетического материала (РНК) вируса и его количество (вирусная нагрузка) в образце крови.

    РНК HCV может быть обнаружена в концентрации, находящейся за нижней границей линейного диапазона концентраций. Линейный диапазон концентраций — это диапазон, в котором можно точно посчитать количество копий возбудителя.

    Полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией в режиме реального времени.

    Какой биоматериал можно использовать для исследования?

    Как правильно подготовиться к исследованию?

    Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

    Общая информация об исследовании

    Вирус гепатита С (HCV) — РНК-содержащий вирус из семейства Flaviviridae, который поражает печень. Он способен размножаться в клетках крови (нейтрофилах, моноцитах и макрофагах, В-лимфоцитах) и вызывать криоглобулинемию, болезнь Шегрена и В-клеточные лимфопролиферативные заболевания. HCV благодаря высокой мутационной активности способен избегать воздействия защитных механизмов иммунной системы. Существует 6 генотипов и множество субтипов вируса, которые имеют разные значения для прогноза развития заболевания и эффективности противовирусной терапии.

    Основной путь передачи инфекции — через кровь (препараты для переливания элементов крови и плазмы, донорские органы, нестерильные шприцы, иглы, инструменты для татуирования, пирсинга). Вероятно заражение при половом контакте и ребенка от матери во время родов, но это случается нечасто.

    Острый вирусный гепатит, как правило, характеризуется бессимптомным течением и остается невыявленным в большинстве случаев. Только у 15 % инфицированных заболевание протекает остро — с тошнотой, ломотой в теле, отсутствием аппетита и потерей веса (редко сопровождается желтухой). У 60-85 % инфицированных развивается хроническая инфекция, что в 15 раз превышает частоту хронизации при гепатите В. У 20-30 % больных заболевание приводит к циррозу печени, увеличивая риск развития печеночной недостаточности и гепатоцеллюлярной карциномы.

    Посредством ПЦР выявляют РНК вируса качественно или количественно. Благодаря качественному методу подтверждается присутствие вируса гепатита С и его активное размножение. Количественное определение вирусной нагрузки с учетом генотипа HCV позволяет контролировать проводимую терапию и прогнозировать течение болезни.

    Длительность терапии и периодичность количественного определения РНК вируса гепатита С зависит от генотипа вируса и степени повреждения печени.

    Для чего используется исследование?

    • Для подтверждения диагноза «вирусный гепатит С».
    • Для прогнозирования течения вирусного гепатита С.
    • Для мониторинга противовирусной терапии и решения вопроса о дальнейшей тактике лечения.

    Что означают результаты?

    • Не обнаружено — РНК вируса гепатита С не обнаружена или значение ниже предела чувствительности метода (200 копий/мл = 400 МЕ/мл).
    • 2*10^6 копий/мл (>4*10^6 МЕ/мл) — РНК вируса гепатита С обнаружена. Высокая виремия.
    • >1,0*10^8 копий/мл (>2*10^8 МЕ/мл) — РНК вируса гепатита С обнаружена в концентрации выше линейного диапазона концентраций.

    Линейный диапазон концентраций РНК вируса гепатита С, определяемых детектирующим амплификатором, составляет 7,5*10^2 – 1,0*10^8 копий/мл (1,5*10^3 – 2*10^8 МЕ/мл).

    • Уровень вирусной нагрузки крови не указывает на степень повреждения печени и тяжесть заболевания. Для их оценки необходимо исследовать биохимические показатели и материалы биопсии.
    • При планировании лечения очень важно определить генотип вируса гепатита С.

    Диагностика с помощью ПЦР на гепатит С

    Не все знают, для чего используют метод диагностики ПЦР на гепатит С. Одной из широко распространенных групп заболеваний являются инфекционные болезни органов желудочно-кишечного тракта. Чаще всего страдают желудок (язвы), кишечник (колиты, энтериты) и печень (гепатиты).

    На печень среди всех вышеперечисленных органов возлагается наибольшая нагрузка. В организме роль печени крайне важна:

    1. Практически все реакции метаболизма протекают в печени (именно здесь образуются все виды жизненно необходимых компонентов, позволяющих организму полноценно функционировать).
    2. Печень является главным органом, осуществляющим детоксикационную функцию. С ее помощью (в частности, через желчь) производится удаление многих субстратов, способных вызвать интоксикацию и привести к тяжелым последствиям.

    К сожалению, многие люди не следят за своим здоровьем, из-за чего начинает страдать печень. Обычно развиваются гепатиты различной этиологии (вирусные, токсические).

    Определение гепатита

    Вирусные гепатиты занимают важное место среди заболеваний печени. Тяжесть протекания заболевания, сложность лечения выносят их на первое место среди патологии другой природы этого органа.

    Все гепатиты подразделяются на острые и хронические. К острым относят гепатит А и В. Среди хронических на первом месте гепатит С.

    Данное заболевание вызывается вирусом гепатита С. Характерной чертой является то, что заболевание долгое время может протекать без каких-либо клинических проявлений.

    Передается оно преимущественно через кровь. С током крови вирус заносится в печень, где начинает размножаться в ее клетках. В результате накопления вирионов происходит разрушение зараженного гепатоцита. В ответ на это начинают вырабатываться антитела, которые начинают атаковать остатки гепатоцитов. Из-за этого со временем нарабатывается пул против клеток печени, что усугубляет течение заболевания.

    Из-за того, что болезнь протекает малосимптомно или бессимптомно, а клинические признаки появляются только при значительном поражении клеток, эта болезнь требует создания методов диагностики, позволяющих выявить ее наличие и принять соответствующие меры.

    Диагностика гепатита С: качественный и количественный анализы

    В настоящее время для диагностики гепатита С используются такие методы, как биопсия печени, иммунограмма.

    Они позволяют непосредственно определить наличие пораженных гепатоцитов (исследование биоптата печени) или специфических антител против пораженных клеток (иммунограмма). Однако существует метод, который позволяет достоверно определить наличие самого вируса. Это ПЦР — полимеразная цепная реакция.

    Суть этого метода заключается в том, что в определенных условиях происходит наработка цепей РНК. Это происходит из-за того, что в крови или исследуемом биоптате имеются фрагменты вирусной частицы. При соединении их с некоторыми молекулами в среде происходит синтез цепей, комплементарных вирусной РНК. При их последующем анализе и сопоставлении с известной нуклеотидной последовательностью вируса гепатита С удается выявить, имеется ли в организме данный вирус и присутствует ли поражение печени.

    ПЦР проводится после выявления в крови специфических антител против вируса гепатита. После проведения теста выносится результат — РНК “обнаружено” или “не обнаружено”. Изредка он может гласить “недостаточно материала” — в таком случае необходим повторный анализ на гепатит С.

    Если количество вирусных частиц меньше необходимого минимального количества, то можно говорить о том, что гепатита нет, а минимальные количества генетического материала могли быть “спутаны” из-за мимикрии генетического материала или некоторых последовательностей нуклеотидов, которые случайно смогли совпасть с таковой у вируса.

    1. При ПЦР отрицательный результат может наблюдаться, когда в самом деле имеются вирусные частицы в крови, однако их настолько мало (заражение произошло недавно или проведению анализа предшествовала длительная и интенсивная противовирусная терапия), что тест-система просто не смогла нормально определить их концентрацию. РНК — «не обнаружено».
    2. Если ПЦР имеет положительный результат, то вирусных частиц в крови наблюдается настолько много, что их количество превышает нижний порог чувствительности тест-системы. В этом случае высок риск развития инфекционного процесса (или он уже присутствует в довольно запущенной стадии). Обычно высокое количество вируса уже является показанием к лечению и последующей пересадке печени.

    Иногда тест может становиться ложноположительным или ложноотрицательным.

    Ложноотрицательный результат ПЦР гепатита наблюдается в том случае, когда в среде для проведения реакции присутствуют некоторые компоненты, которые ингибируют образование копий вирусной частицы. Из-за этого не удается получить истинной картины состояния крови, что способствует пропуску вируса и прогрессированию заболевания. На реакцию может повлиять и присутствие в крови гепарина (за счет снижения относительной вязкости крови). Неправильная интерпретация анализа возможна и тогда, когда не были соблюдены условия транспортировки и хранения исследуемого материала.

    Читайте так же:  Кормушка для кур своими руками из труб

    Ложноположительные результаты, когда диагностируется гепатит С, ПЦР чаще всего дает при загрязнении пробирки или рабочей среды. Кроме того, положительные результаты могут наблюдаться при наличии и вирусов гепатита других групп (за счет перекрестного реагирования).

    Качественный анализ ПЦР на выявление гепатита С

    Наличие в крови большого количества криоглобулинов тоже непосредственно влияет на проведение ПЦР. Из-за этого перед проведением анализа на гепатит С обязательно нужно определить в крови их концентрацию, чтобы выявить искажение результата заранее и предотвратить его.

    После проведения указанных тестов становится понятно, имеются ли в крови вирусные частицы. При их определении рекомендовано немедленно начинать противовирусную терапию с целью замедления прогрессирования процесса. В отличие от гепатита В, полного излечения от гепатита С не наблюдается; болезнь лишь переходит в латентную стадию и начинает протекать медленнее. Поражение печени при этом неизбежно. На последней стадии процесса, когда печень уже не справляется со своей функцией, может потребоваться ее трансплантация.

    Лечение проводится преимущественно двумя препаратами — интерфероном и рибавирином.

    Доказана их эффективность в замедлении процесса поражения гепатоцитов. Попутно обязательно назначается инфузионная терапия с целью облегчения работы печени.

    Все пациенты, у которых наблюдалось увеличение количества вирусных частиц в крови, обязательно находятся на учете у гепатолога. Несколько раз в год им рекомендуется проходить профилактический осмотр с целью определения прогрессирования процесса и своевременного выявления показаний к трансплантации. Кроме того, можно использовать и гепатопротекторы, хотя мнения врачей несколько расходятся. Одни считают, что данные препараты позволяют приостановить процесс и защитить еще не пораженные гепатоциты; другие же убеждены, что толку от их приема нет и следует проводить интенсивную противовирусную терапию.

    Таким образом, гепатит С относится к категории заболеваний, выявление которых составляет некоторые трудности. Совершенствование методов диагностики, а также своевременные профилактические осмотры позволят снизить частоту развития данного заболевания. Немаловажной является и профилактика данной болезни. Следует тщательно избегать контактов с кровью, отказаться от приема наркотиков, только тогда это заболевание будет искоренено. Главное в профилактике и лечении — сознательное отношение пациента к своему здоровью.

    Анализ на вирус гепатита С методом ПЦР

    ПЦР (полимеразная цепная реакция) на гепатит С — это анализ, выявляющий антитела к возбудителю. Данное исследование настолько сложно, что стоит сначала поговорить о самом заболевании, чтобы понять суть анализа. В настоящее время во всем мире этому опасному заболеванию подвержено большое количество людей. И это только те люди, которые больны гепатитом С, а ведь существуют и другие разновидности патологии.

    Зачем нужна ПЦР-диагностика?

    Как известно, немалая часть успеха в лечении любого заболевания принадлежит правильной диагностике. Еще в 1983 году Кэри Муллис совершил прорыв в медицине, открыв полимеразную цепную реакцию (ПЦР). Именно благодаря этому анализу возможно точно выяснить, какая инфекция вызвала заболевание. Например, в случае с гепатитом можно точно назвать возбудителя болезни, подобрать правильное лечение.

    До изобретения полимеразной цепной реакции (ПЦР) ученые могли единственным способом получить генетический материал: вырастить живое существо, которое бы содержало нужный ген. ПЦР-диагностика дает возможность вырастить такой ген без участия всего организма.

    Кроме того, анализ ПЦР предоставляет такую возможность, как подбор нужного лекарства для устранения инфекции. Это очень важно при гепатите, поскольку любое неподходящее лекарство с удвоенной силой действует на печень. ПЦР позволяет выявить искомый ген за несколько часов, используя специальную аппаратуру.

    Изучение этого вируса началось сравнительно недавно — лишь в 1989 году гепатит С был выделен в определенную группу и отделился от форм А и В. Вирус С имеет 40 разновидностей и способен менять свою генетическую структуру. В этом его особенность и коварство. Размножаясь в организме человека, вирусы хорошо приспосабливаются и вырабатывают антитела, которые способны противостоять многим медикаментам.

    Гены вируса представляют собой РНК, которые заключены в оболочку. Заражение происходит чаще всего через кровь. В засохшей крови вирус может находиться в живом состоянии от нескольких часов до нескольких дней. Попав в организм, он с током крови достигает печени и уже в ее клетках начинает размножаться, повреждая их.

    Выработанные организмом лимфоциты для борьбы с вирусом тоже губительно действуют на печень. Поэтому очень важно провести своевременную и качественную диагностику. Биохимический анализ на гепатит С позволяет выявить болезнь и обнаружить природу ее появления.

    Полимеразная цепная реакция на гепатит С

    Анализ полимеразной цепной реакции ПЦР делается всем людям, у которых были обнаружены антитела к этой болезни. В результатах указывается запись «обнаружен» или «не обнаружен».

    Особенностью анализа ПЦР является то, что вирус можно обнаружить, даже если в крови пациента содержится минимальное количество вирусных элементов. Другой важной особенностью данного исследования является то, что он дает количественный показатель содержания вируса в крови.

    Если была выявлена отрицательная ПЦР, считается, что в данный период вирус может быть в спящем состоянии. Диагностика гепатита С с помощью ПЦР дает большую вероятность достоверности показателей. Это позволяет выявить инфекцию на ранних сроках заболевания, когда в крови еще не выработались антитела.

    ПЦР условно делится на два вида: качественная и количественная. При качественном исследовании в крови пациента выявляется РНК HCV. Количественный же анализ направлен на измерение уровня РНК HCV в биологическом материале.

    Благодаря этому врачи могут наблюдать активность размножения вирусов в организме больного (вирусная нагрузка). После того как начата противогепатитная терапия, анализ ПЦР проводится регулярно, с определенной периодичностью, чтобы выявить динамику болезни.

    Это делается в следующих целях:

    1. Для выявления эффективности проводимого лечения.
    2. Для определения точных дозировок лекарственных препаратов.
    3. Для установления сроков приема медикаментов.
    4. Для подбора нужных антивирусных средств.

    Помимо этого, эффективность терапии определяется по биохимическому анализу крови. Основу лечения составляет пегилированный или простой альфа-интерферон вместе с рибавирином. Пройдя вовремя анализ ПЦР на гепатит С, вы сможете выявить болезнь, что в значительной степени определит успех дальнейшего лечения.

    Как передается заболевание?

    В быту гепатит практически не передается, только в крайних случаях, например, после повреждения кожных покровов при использовании общей бритвы, ножниц больного человека. При попадании крови инфицированного человека на рану здорового вероятность заразиться велика. При половом контакте также имеется риск заражения, но он минимален.

    Большая вероятность подхватить вирус есть в медицинских учреждениях, косметологических кабинетах, там, где нарушаются нормы гигиены. Но если инъекции, стоматологические услуги, косметические процедуры, переливание крови производятся одноразовыми инструментами с использованием гигиенических перчаток, то риск заразиться любым из видов гепатита сводится к нулю.

    Заболевание может передаться и от инфицированной матери к ребенку в момент родов. В зону риска попадает и медицинский персонал. Поэтому существует ряд работников, которым следует регулярно проходить анализы на обнаружение вируса гепатита С, придется сдавать их систематически, чтобы подтвердить или опровергнуть наличие болезни.

    Гепатит С — это опасное заболевание, долго протекающее без каких бы то ни было симптомов; если вовремя его не обнаружить, то оно переходит в стадию цирроза, который вылечить невозможно.

    Подготовка и процедура сдачи биоматериала

    Подготовительные процедуры для проведения этого анализа не нужны. Все, что касается индивидуальных случаев, заранее обсуждается с лечащим врачом.

    Процедура прохождения исследования включает в себя следующие действия:

    1. Накладывается жгут на предплечье, чтобы на время остановить циркуляцию крови. Это нужно для обнаружения вены на руке, которая начинает активно проступать сквозь кожу.
    2. Место введения иглы протирается спиртом.
    3. Игла вводится в вену.
    4. К игле крепится трубка, куда поступает кровь из вены.
    5. После забора нужного количества крови игла вынимается.
    6. К месту укола прикладывается марлевый или ватный тампон.
    7. Место укола прижимается согнутой рукой.

    Следует иметь в виду следующее:

    1. В настоящий момент вакцины для профилактики гепатита С не существует.
    2. После заражения антитела формируются на протяжении недели и более, поэтому на ранних этапах заболевания анализы на вирус С могут дать ложный результат. Важно провести несколько исследований в случае подозрения на инфекцию.
    3. Все доноры крови и органов проходят в обязательном порядке анализы на наличие гепатита С.
    4. При подозрении на инфицирование, возможно, понадобятся и другие анализы для выяснения того, насколько поражена печень. Может быть произведена проверка на билирубин, щелочную фосфатазу, аланинаминотрансферазу и аспартатаминотрансферазу.
    5. Медицинские учреждения в обязательном порядке предоставляют сводки о заражении некоторыми видами вирусов. При обнаружении вспышки гепатита С в регионе местные здравоохранительные органы должны оповестить через СМИ всех жителей, находящихся в группе риска.

    При подозрении на болезнь в первую очередь нужно провести качественный анализ, который даст достоверные результаты.

    ДНК и ПЦР вируса гепатита В

    Исследования ДНК и ПЦР вируса гепатита В являются самыми чувствительными анализами, которые позволяют обнаружить в тканях печени молекулярные следы ДНК, идентифицирующие наличие вируса. Суть метода заключается в многократном копировании фрагмента ДНК, принадлежащего возбудителю болезни.

    ПЦР гепатита типа В — это полимеразная цепная реакция внешнего химического реагента с исследуемым биологическим материалом, направленная на выявление молекул вирусного ДНК в крови и их количественных показателей на единицу объёма. Анализ назначается в следующих случаях:

    • при возникновении признаков гепатита В у пациента;
    • во время диагностических мероприятий при микст-гепатитах;
    • для уточнения эффективности терапии.
    Читайте так же:  Морфология риккетсий хламидий микоплазм

    Для ПЦР анализа делается забор венозной крови. Перед исследованием необходимо воздержаться от приёма пищи примерно 8 часов.

    Нормальным результатом при выявлении ДНК у вируса считается показатель «не обнаружен». Он означает, что вирус в крови отсутствует или его содержание незначительное. Окончательный диагноз может выставить только специалист на основании комплексного биохимического и иммунологического анализа кровяной плазмы на гепатит типа B. Врач назначает курс терапии. Самолечение влечёт за собой слишком большой риск.

    Для ПЦР-анализа делается забор венозной крови

    Метод ПЦР даёт возможность выявить ДНК возбудителя даже при минимальном его присутствии в отобранной пробе крови. Кроме того, анализ позволяет обнаружить антигены, которые уже выработались на вирус. Каждый из антигенов свидетельствует об определённой стадии болезни:

    • HBsAg — вирус присутствует в данный момент.
    • Анти-HBcor — возбудитель в настоящее время отсутствует, но имелся в прошлом.
    • Анти-HBs — в крови имеются антитела к гепатиту B (как вариант — герпесу, ВИЧ, хламидиозу, микоплазмозу, кандидозу, туберкулёзу, клещевому энцефалиту и многим другим болезням).

    Патология и её признаки

    Гепатит B или HBV — это вирусная инфекция, поражающая клетки печени. Она опасна не только непосредственным воздействием на паренхиму органа, ослабляющим барьерную функцию и общий иммунитет. Возможны и более тяжёлые последствия, такие как цирроз печени и возникновение злокачественных новообразований.

    HBV передаётся через кровь человека, инфицированного гепатитом, его экскременты, через контакты со слизистыми оболочками, особенно при половом акте, повреждениями кожи, через нестерильные шприцы при переливании крови или при полостных операциях. Возможно заражение новорожденного его больной матерью при прикосновении к трещинам на её сосках.

    Для гепатита B характерны следующие симптомы:

    Непривычная утомляемость

    • нарастающая усталость при небольших нагрузках;
    • непривычная утомляемость;
    • тяжесть в области правого подреберья;
    • пониженный аппетит, тошнота;
    • желтушность кожных покровов, склер глаз;
    • светлый кал;
    • тёмная моча;
    • болезненные ощущения в суставах.

    Инкубационный период, после которого начинают проявляться эти признаки, составляет от месяца до полугода. Это срок накопления клеток вируса в печёночном кровотоке. Когда их концентрация доходит до критической массы, вирус прорывает мембраны гепатоцитов и продолжает размножаться уже внутри клеток. В результате клетки печени гибнут, развивается цирроз, который, при отсутствии должных терапевтических мер, приводит пациента к летальному исходу. Своевременный анализ крови на ПЦР и ДНК гепатита B позволяет избежать негативных.

    Показаниями к ПЦР являются:

    • положительный тест на ДНК, подтверждающий диагноз — гепатит B;
    • острый и хронический гепатит;
    • микст-гепатиты;
    • количественное определение вируса в кровяной сыворотке;
    • разработка тактики эффективной терапии.

    Подготовка к анализу

    Подготовка к диагностике с помощью ПЦР определяется видом биоматериала. Так кровь и мочу сдают только в первой половине дня, натощак. Также берутся мазки и соскобы из урогенитальной области. Ограничением для женщин является только менструация. Для обоих полов ограничиваются половые контакты накануне исследований.

    Результаты ПЦР можно будет считать достоверными только при правильной подготовке пациента к процедуре. Это исследование подразумевает соблюдение следующих условий:

    • полный душевный комфорт, отсутствие всяких волнений. Для обеспечения этого анализ можно сдать даже дома. Нужно только вызвать к себе врача с соответствующим оборудованием;
    • воздержание от пищи, алкоголя, курения, физической активности минимум за 8-12 часов перед анализом, иначе данные исследования будут искажены;
    • 15-20 минут полной релаксации перед забором крови;
    • прекращение приёма лекарственных препаратов (если это не представляется возможным, лаборатория должна быть предупреждена);
    • детям в возрасте до пяти лет в течение получаса перед анализом необходимо давать пить кипячёную воду маленькими порциями.

    Как проходит исследование

    В основе анализа ПЦР лежат принципы, которыми пользуется молекулярная биология. Они заключаются в использовании специальных ферментов, расщепляющих и копирующих участки ДНК и РНК возбудителя инфекции, который обнаружен в крови. После проведения этой операции, полученные образцы идентифицируются по базе данных, имеющихся в лаборатории. Одновременно выявляется вид инфекции и концентрация в крови возбудителя.

    Амплификатор

    Для проведения исследования используется амплификатор — термостат, способный нагревать и охлаждать пробирки с биоматериалом. Это необходимо для активации репликационных процессов. От точности температурных параметров зависит достоверность анализа.

    Расшифровка результатов

    Позитивным результатом для пациента является лабораторное заключение «не обнаружено». Оно означает отсутствие в крови ДНК гепатита B. В цифровом выражении это примерно 120 МЕ/мл, или 200 копий на такую же единицу объёма крови. Данное значение — норма. Требованием к биологическому материалу является то, что он не должен быть загрязнён.

    Расшифровка других итогов анализа позволяет поставить следующие диагнозы:

    • Концентрация в крови ДНК гепатита B более 200 копий, но ниже критического уровня. Выраженная патология отсутствует.
    • Виремия в умеренной форме, доходящей до 500 копий на мл. Выбор лечения зависит от показателей биопсии печени и степени ухудшения её функций.
    • Повышенная концентрация вируса (более 500 копий/мл). Воспалительный процесс в активной фазе и требует интенсивной противовирусной терапии.
    • Предельная вирусная нагрузка (свыше 800 копий на мл.). Терапевтические мероприятия разрабатываются исходя из состояния больного и целиком направлены на его максимально возможное улучшение.

    Для пациента хорошим результатом является заключение «не обнаружено»

    Определение количественных показателей содержания ДНК гепатита B при проведении ПЦР является основой для выбора лечебного курса. Через три или шесть месяцев анализы проводятся снова, чтобы проверить эффективность противовирусной терапии.

    Особенность полимеразной цепной реакции

    В методике ПЦР используется два подхода к определению ДНК, принадлежащего вирусу: качественный и количественный.

    Качественный подход подтверждает или отрицает наличие гепатита B. ПЦР назначается по просьбе пациента, подозревающего, что он заражён HBV-инфекцией или в том случае, когда ранняя диагностика иным способом не даёт однозначных результатов.

    Если вирус гепатита B удаётся выявить не позже, чем через две недели после его проникновения в организм, положительный прогноз при лечении наиболее вероятен. В дальнейшем болезнь начнёт прогрессировать. Приблизительно через два месяца она перейдёт в хроническую фазу. Полное излечение в таком случае станет невозможным.

    Количественный подход в ПЦР применяется только при обнаружении вируса. Он оценивает:

    • конкретную вирусную нагрузку на печень;
    • интенсивность прогрессирования заболевания;
    • устойчивость к препаратам противовирусной группы;
    • результативность лечения.

    Эти показатели имеют прямое практическое значение. Особенно количественный показатель ДНК. От концентрации вируса в кровотоке печени зависит прогноз в острой фазе гепатита B. Так низкая концентрация вирусных клеток почти полностью исключает переход острого гепатита в хронический. Такие больные не представляют опасности для окружающих. Высокая вирусная нагрузка способствует хронизации патологического процесса и возможности заражения гепатитом людей, контактирующих с больным.

    Существует также связь между концентрацией в крови генов вируса и цирротическим перерождением печени, и возникновением рака её паренхимы.

    Анализы ПЦР помогают врачу обнаружить носители вируса

    Результативность терапии противовирусными препаратами определяется по степени снижения концентрации ДНК гепатита B в печёночном кровотоке. Достаточным результатом считается уменьшение вирусной нагрузки в 1-2 раза при интенсивном лечении в течение от трёх месяцев до полугода. Более низкие показатели требуют изменения лечебного курса.

    Прогноз развития патологии и назначения соответствующей терапии исходит из:

    • количественного объёма ДНК печёночного вируса в кровяной сыворотке;
    • сопутствующих биохимических показателей (например, уровня лейкоцитов в крови и содержания там билирубина);
    • маркеров вирусной инфекции;
    • результатов биопсии печени.

    Общие цели ПЦР

    Анализы с помощью полимеразной цепной реакции помогают врачу:

    • обнаружить носители вируса;
    • прогнозировать процесс развития гепатита типа B;
    • убедиться в переходе болезни в хроническую форму;
    • мониторить активность вируса на всех фазах развития;
    • выявить мутантные и скрытые штаммы гепатита B;
    • оценить эффективность лечения вируса при выборе определённой тактики и изменить её в случае недостаточной успешности.

    Преимущества метода

    В отличие от других анализов, которые применяются для диагностики гепатита B, ПЦР обладает:

    Анализ ПЦР обладает исключительной чувствительностью

    1. Исключительной чувствительностью. Методика даёт возможность исследователю обнаружить возбудителя заболевания, даже если концентрация молекул его ДНК в крови минимальна. Это позволяет принять профилактические и лечебные меры на ранней стадии болезни, когда внешне она ещё не выражена никакими симптомами.
    2. Широким охватом возможностей. ПЦР способен выявить не только возбудителя вирусного гепатита B, но и ряд других патологий.
    3. Универсальностью подходов. Биоматериалом для исследований может быть кровь, слюна, клетки слизистых и кожных покровов.
    4. Оперативностью. Заключение будет готово ровно через день после забора крови (сам результат анализа получают не позже чем через 7 часов).
    5. Достоверностью. При соблюдении всех условий проведения ПЦР-методика никогда не показывает ложных данных.
    6. Ценовой доступностью исследования. По стоимости ПЦР лишь слегка превышает обычные анализы, использующие кровь как биоматериал.

    Единственной издержкой исследования является его технологическая сложность. Для качественного выполнения ПЦР требуется исключительно чистый биоматериал, современное оборудование и хорошо подготовленный персонал. Обращаться за диагностикой по этому методу предпочтительней в специализированные лаборатории.

    Вирусный гепатит B относится к заболеваниям, полное излечение от которых представляется возможным только на самых ранних стадиях развития. Выявить болезнь именно в этой фазе помогает сверхчувствительная диагностика по методу ПЦР. Первые симптомы, вызывающие подозрение на поражение печени вирусом, должны быть поводом для обращения к специалисту. Если диагноз подтвердится, лечение следует начинать немедленно. Это улучшит прогноз и повысит вероятность поддержки печени в здоровом состоянии на долгие годы.